簡要描述:Quick Cell 外泌體提取試劑盒(細胞上清)是由細胞特異性分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認為具有細胞間信使的功能,參與細胞間的通訊。然而關于它的分泌和攝取及其組成、“運載物"及相應功能的分子機制目前尚不明晰。
產(chǎn)品分類
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品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC15L412 |
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規(guī)格 | 20T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
產(chǎn)品描述
外泌體(exosome)是由細胞特異性分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認為具有細胞間信使的功能,參與細胞間的通訊,然而關于它的分泌和攝取及其組成、“運載物"及相應功能的精確分子機制目前尚不明晰。
外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,經(jīng)過優(yōu)化處理,適用于細胞培養(yǎng)上清液(尿液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒, 可用于電鏡分析、NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細胞學實驗和動物實驗等。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Quick Cell 外泌體提取試劑盒(細胞上清專用) | AC15L412 | 20T |
產(chǎn)品組分
組分 | 規(guī)格 |
A. 外泌體濃縮試劑(ECS) | 100mL |
B. 外泌體純化濾器(EPF) | 2.0mL (20Tubes) |
*RNase/DNase Free, Sterile |
運輸與保存
常溫運輸。常溫保存,有效期24個月。【注】:使用前請充分混勻。
自備材料
高速離心機(可以達到10000 g離心力),渦旋振蕩器;50 mL或15 mL離心轉(zhuǎn)子,2 mL離心轉(zhuǎn)子;50 mL或15 mL離心管,5 mL離心管;
1×PBS緩沖液。
使用方法
樣品預處理
取樣:如果是凍存樣品,從冰箱取出后于25℃水浴中進行解凍,將融化后的樣品置于冰上;如果是新鮮樣品,收集樣品后置于冰上。
樣品初始用量:對于細胞上清樣品,單次提取時的樣品量為20 mL。
離心去除細胞碎片:將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中,4℃,3000×g離心10 min,取上清轉(zhuǎn)移到新離心管中。
提取外泌體
上清液預處理:在去除雜質(zhì)的離心上清液中加入外泌體濃縮試劑(ECS),加入ECS的量與細胞上清液的體積比為1: 4.即若細胞上清液液體積是20 mL,則ESC的量為5 mL。
溶液混合:加入ECS試劑后將離心管蓋緊,通過渦旋振蕩器混勻1 min,再放置于2℃至8℃靜置2 h。
沉淀外泌體:取出裝有混合液的離心管,4℃以10000×g離心60 min,棄上清,沉淀中富含外泌體顆粒。【注】:盡可能吸凈上清液。
外泌體重懸:取100 μL 1×PBS均勻吹打離心沉淀物,待其均勻懸浮在PBS中后,將重懸液轉(zhuǎn)移至新的5 mL離心管中。
收獲外泌體顆粒:將含有重懸液的5 mL離心管,4℃以12000×g離心2 min,保留上清液,該上清液中富含外泌體顆粒。
純化外泌體
純化外泌體:將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入外泌體純化濾器(EPF)上室中,4℃,3000×g離心10 min,離心后收集EPF柱管底的液體,此液體即為純化后的外泌體顆粒。
外泌體的保存:純化后的外泌體以保存于 -80℃ 低溫冰箱中,以備后繼實驗使用。
注意事項
本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。
對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。
當血清樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。
針對外泌體標志蛋白(CD 63, CD 9, CD 81等)進行Western blot檢測,可以鑒定所提的外泌體。
多數(shù)情況下,細胞在體外培養(yǎng)需要血清,但血清中含有外泌體,為了去除血清的外泌體,可以通過100000×g超速離心過夜,去除血清外泌體或者可選擇無血清培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
在收獲細胞時,應確定死亡細胞占所有細胞5%以下。細胞死亡過程中會釋放大量大小不等的囊泡,細胞最終會裂成碎片,它們在外泌體的純化過程中會污染活細胞產(chǎn)生的外泌體,影響外泌體的提取。
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